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用氯仿异戊醇提取DNA的方法= 25241

作者:365bet365官网发布时间:2019-09-28 07:34

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1)将为1。
将5 ml培养物倒入微量离心管中,以12,000 g离心30秒,吸出培养物并尽可能干燥细菌。[重悬1 ml冰冷的STE溶液并离心。以6000 rpm的速度去除上清液2分钟。该步骤是去除杂质,例如培养基和残留在细菌表面上的残留物,并使随后的反应干扰最小化。加冰5分钟;[在混合过程中避免气泡的方法是将黄色喷枪的压力从200 ul调整到约50 ul。太高是产生气体的主要原因。解决方案二:0
用2 mol / l NaOH + 1%SDS(当前可用)[200μl2 M NaOH + 200μl10%SDS = 2 ml溶液II]覆盖管,并迅速[尽快开始,但要缓慢摇动]]颠倒5次以混合内容物。请勿摇晃,将离心管放在冰上;[直接从离心管底部添加喷枪的黄色头,如果它缓慢上升,则添加II。混合开始并提高效力]4.添加150μl预冷的溶液III冰,盖上管并轻轻颠倒10秒钟,以使溶液III在粘性细菌裂解液上均匀分布[[添加至II][将EP管压扁并旋转几次以进行混合后,将其倒在3-5 m的冰上。以12000g离心5分钟(最好10分钟)。另一个离心管[针吸黄色,缓慢吸,不要摇动下层][吸上清液,然后离心5分钟,效果更好]6.加入等量的苯酚:氯仿:异戊醇,搅拌混合时,将上清液转移到另一个离心管中1分钟。[添加和转移在带手套的通风厨房中进行。?或氯仿(如果离心)。
枪头又用了一个。
将5毫升EP管放入特殊的垃圾袋中,密封垃圾袋,然后将其放入特殊的垃圾桶中。
]7.用2倍体积的乙醇沉淀双链DNA,混合并在4度下放置30分钟[可见的絮凝剂]8.在12000 g下离心5分钟,小心吸出上清液然后,将管子放在纸巾上(或使用一次性吸头连接到真空管上并轻轻地抽水)以除去管子壁上的水滴。是的(将核酸在空气中干燥10分钟);用蓝色的枪吸,然后用黄色的枪吸,最后用白色的枪吸。
在低速行驶的情况下,它可以放置在超干净工作台的挡风玻璃的出风口处,并且吹气速度更快。
如果不能长时间干燥,则可以在50度烤箱中烘烤5分钟]9。
管壁和沉淀物用200ul乙醇洗涤,该乙醇用70%冰预冷。DNA不溶于70%乙醇。30%的水的目的是溶解盐并避免干扰随后的酶消化或其他操作。略有关联,但没有太大关系];以12000 rpm在4度下离心5分钟;使用黄色枪头吸出上清液,然后立即离心30秒,然后用白色枪用头部吸出剩余的溶液:吹打工作台30分钟,将核酸溶解在50μlw的溶液中,在-20度或4度下保存。
[加水之前,用纸擦干管壁上的干酒精。加水时,请注意不要滚动未喷洒的乙醇。首先,将1000X Rnase母液加入水中,并在37°下放置1小时以消化RNA]


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